生物信息学基础知识【03】二代测序原理

二代测序原理：

1、DNA待测文库构建。 超声波把DNA打断成小片段，一般200--500bp，两端加上不同的接头
2、Flowcell。一个flowcell，8个channel，很多接头
3、桥式PCR扩增。每个DNA片段将在各自位置集中成束，每一束含有单个DNA模板的很多拷贝，目的：将碱基的信号强度放大，达到测序所需的信号要求。
4、测序。边合成边测序。反应所需材料，dNTP的3’端特殊处理，不能继续反应，因此每次只能添加一个碱基，另外每个碱基有一种颜色。dNTP添加到链上后，所有未使用游离dNTP和DNA聚合酶会被洗脱掉。接着，再加入激发荧光所需的缓冲液，用激光激发荧光信号，并有光学设备完成荧光信号的记录，最后利用计算机分析将光学信号转化为测序碱基。这样荧光信号记录完成后，再加入化学试剂淬灭荧光信号并去除dNTP 3’-OH保护基团，以便能进行下一轮的测序反应。

双端测序：正义链测100，反义链测100，合起来200，这样测序结果比较准确。